酵母單雜交(Yeastone-hybrid)是根據(jù)DNA結(jié)合蛋白(即轉(zhuǎn)錄因子)與DNA順式作用元件結(jié)合調(diào)控報(bào)道基因表達(dá)的原理，克隆與靶元件特異結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子基因(cDNA)的有效方法。其理論基礎(chǔ)是：許多真核生物的轉(zhuǎn)錄激活子由物理和功能上獨(dú)立的DNA結(jié)合區(qū)(DNA-bindingdomainBD)和轉(zhuǎn)錄激活區(qū)(ActivationdomainAD)組成，因此可構(gòu)建各種基因與AD的融合表達(dá)載體，在酵母中表達(dá)為融合蛋白時(shí)，根據(jù)報(bào)道基因的表達(dá)情況，便能篩選出與靶元件有特異結(jié)合區(qū)域的蛋白。理論上，在單雜交檢測中，任何靶元件都可被用于篩選一種與之有特異結(jié)合區(qū)域的蛋白。

　　酵母單雜交的基本操作過程：

　　(1)設(shè)計(jì)含目的基因(稱為誘餌)和下游報(bào)告基因的質(zhì)粒，并將其轉(zhuǎn)入酵母細(xì)胞。

　　(2)將文庫蛋白的編碼基因片段與GAL4轉(zhuǎn)錄激活域融合表達(dá)的cDNA文庫質(zhì)粒轉(zhuǎn)化人同一酵母中。

　　(3)若文庫蛋白與目的基因相互作用，可通過報(bào)告基因的表達(dá)將文庫蛋白的編碼基因篩選出來。在這里作為誘餌的目的基因就是啟動(dòng)子DNA片段，文庫基因所編碼的蛋白就是啟動(dòng)子基因結(jié)合蛋白。

　　迄今為止，應(yīng)用酵母單雜交體系已經(jīng)識(shí)別并驗(yàn)證了許多與目的DNA序列結(jié)合的蛋白質(zhì)，同時(shí)單雜交技術(shù)還被應(yīng)用于識(shí)別金屬反應(yīng)結(jié)合因子。正向與反向單雜交體系的結(jié)合，還可用于篩選阻礙DNA與蛋白質(zhì)相互作用的突變的單個(gè)核苷酸。

　　目前，在研究DNA—蛋白質(zhì)相互作用中，酵母單雜交體系主要有以下3種用途：①確定已知DNA—蛋白質(zhì)之間是否存在相互作用;②分離結(jié)合于目的順式調(diào)控元件或其他短DNA結(jié)合位點(diǎn)蛋白的新基因;③定位已經(jīng)證實(shí)的具有相互作用的DNA結(jié)合蛋白的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域，以及準(zhǔn)確定位與DNA結(jié)合的核苷酸序列。